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對色譜柱的沖洗保存
更新時間:2019-04-28   點擊次數:1501次
   對色譜柱的沖洗保存
 
  前面提到了柱型號,不同型號的色譜柱壽命當然也不一樣,跟前面說到的C18類似的,CN柱、苯基柱等鍵合硅膠柱都具有較長的使用壽命。不過所有基于硅膠基質的色譜柱都有一個天生的弱點,就是硅膠是能被水溶解的,雖然溶解度很小,但是長年累月使用,尤其在反相色譜系統中,累加了高鹽、高pH、高柱溫、高比例水相等方法參數后,硅膠的流失尤為明顯。我做過一個項目,流動相含鹽,柱溫高達50度,基本上一根色譜柱半年就報廢了。不過,是有一種方法可以解決這個問題的,就是在色譜柱前加一個柱芯與色譜柱類型相同的預柱,也叫保護柱,當流動相里溶解預柱里的硅膠飽和以后,就不再侵蝕色譜柱的硅膠,從而大大延長色譜柱壽命。不過不到萬不得已還是不要使用特別苛刻的流動相,要知道預柱的柱芯也是很貴的,那就是一根較短的色譜柱啊,就算保住了色譜柱,經常換柱芯也是吃不消的。
 
  還有一類柱子,就是手性分離柱,這在醫藥行業是很大的一個應用。通常手性色譜柱是正相柱,這就要求我們在使用手性柱之前要先把系統置換干凈,再接上柱子用流動相沖洗平衡進樣。通常是甲醇、異丙醇、正已烷+異丙醇、流動相這樣的順序,如果忘記這個過程,會造成很大的麻煩。而且有一些手性柱是涂敷柱,例如淀粉、纖維素等大分子涂敷柱非常怕水,如果系統中原來的反相流動相沒有置換干凈,就會對色譜柱造成不可逆損傷,甚至報廢。近年來,科學家也開發出了鍵合的手性柱,相比較要穩定的多,甚至也可以應用反相色譜系統。
 
  使用后對色譜柱的沖洗保存也比較重要,使用了緩沖系統的尤其要注意。這里推薦一個反相色譜系統的通用沖洗流程:將所有通道置換成含有較低有機相比例的水相中,比如10-30%乙腈或甲醇,然后沖洗1個小時,然后再梯度增加有機相比例,各沖洗一定時間,終保留在高有機相比例的沖洗液里。低有機相比例的沖洗液是為了盡可能地沖洗緩沖鹽。通常低壓梯度洗脫的液相色譜儀采用的是四元泵,就是單泵四通道,比例閥混合。這種混合方式有個弊端,就是混合效果差,因為各通道不同比例是通過開關各通道閥的時間來控制的。打比方乙腈:緩沖鹽=50:50,如果流速是1.0mL/min,并不是說乙腈和緩沖鹽以各0.5mL/min的流速來混合;而是流速一直是1.0mL/min,但是在往復泵一個來回的時間內,兩個通道分別打開一半的時間,也就是說系統管道里是一段乙腈、一段緩沖鹽。這樣就會造成鹽的析出。所以,往往是兩通道混合,就算沒有用緩沖鹽,還是建議先按比例混合好了,然后走單通道,否則的話一樣會造成鹽析出,或者基線波動。走梯度洗脫的話,往往會把有機相通道(B)中加入一定比例的水,或者把水相通道(A)配成梯度洗脫的初始比例,把有機相通道(B)配成梯度洗脫終的比例。
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